Преподобный Иов Почаевский жил в трудные для православной России годы, когда на западных ее окраинах православный народ Волыни и Галиции подвергся церковным и политическим притеснениям со стороны польско-литовских магнатов. Преподобный Иов был свидетелем Брестской унии 1596 года и последовавшего за ней неудержимого наступления католичества, а также все возраставшего влияния протестантизма. Будучи игуменом монастыря и пользуясь огромным духовным авторитетом, преподобный Иов использовал все свои возможности для борьбы с инославными и еретическими влияниями на народное сознание, для укрепления Православия.

Преподобный Иов (в миру Иоанн) родился в крае, называемом Покутье, лежащем в Галиции между Карпатами и Днестром. Семья его, носившая фамилию Железо, принадлежала к дворянскому роду, хранившему верность Православию. Родителей его звали Иоанном и Агафией.

С детства будущий подвижник обнаружил стремление к иноческой жизни. В 10 лет мальчик оставил родительский дом и просил игумена ближайшего Угорницкого монастыря позволить ему служить братии. Своим усердием он завоевал вскоре любовь монастырского братства, прозорливый же игумен провидел в нем большие духовные дары. На 12 году жизни Иоанн принял монашеский постриг с именем Иов, на тридцатом, уже после многих иноческих подвигов, он был рукоположен в священнический сан (впоследствии он принял схиму, вернув прежнее имя).

Известность о его духовных подвигах широко распространилась по всему краю. Он стал пользоваться особым доверием и покровительством известного защитника Православия на Волыни князя Константина Острожского. Князь Константин обратился к игумену Угорницкого монастыря с просьбой отпустить преподобного Иова в его княжеский Дубенский Крестный монастырь, где в последствии прп. Иов служил игуменом более 20 лет. К этому времени относятся заключение Брестской унии (1596) и последовавшие притеснения православных. Князь Константин, под защитой которого находился преподобный Иов, имел огромное влияние на Волыни, пользовался уважением польского короля Сигизмунда III и Папы Римского Климента VIII. Поэтому униаты и иезуиты не решались препятствовать действиям преподобного.

Во время пребывания в Дубне святой приступил к переводу и распространению православных книг. По благословению святого в 1581–82 гг. князь Константин издал в г. Остроге первопечатную славянскую Библию (Острожская Библия).

Заботы и волнения, связанные с издательскими трудами, а также неприязнь латинян отвлекали святого Иова от монашеского делания. Поэтому преподобный решил оставить Дубенский монастырь и около 1604 года поселился в скромной обители неподалеку – на горе Почаевской.

До прихода подвижника в 1340 году в Почаеве совершилось чудесное явление Божией Матери в огненном столпе. До конца XVI века обитель была пустынной: иноки жили в отдельных пещерах и собирались для молитвы в небольшом храме в честь Успения Божией Матери. В 1597 году в обители появилась великая святыня – чудотворная икона Божией Матери.

Пришедшу Иову в обитель, насельники ея вскоре почувствовали в преподобном духовную силу и единодушно, со слезами просили его стать их игуменом. Святой был вынужден уступить – и вскоре его трудами в обители был построен каменный храм во Имя Пресвятой Троицы, в который был передан запечатленный в камне отпечаток цельбоносной Стопы Божией Матери и Ее чудотворная Почаевская икона. Это был период расцвета монастыря, число иноков в нем сильно возросло.

Но вскоре последовали бедствия: нападение татар, еретиков-протестантов на обитель, побудившие преподобного Иова к большим и скорбным трудам в течение нескольких лет. Особенно важной для укрепления Православия на Волыни была книгоиздательская и литературная деятельность преподобного Иова. В начале XVИИ в. в этом крае осталась всего одна славянская типография – Почаевская. Ее-то и использовал преподобный в целях борьбы с иноверием.

Вместе с этими трудами проходила и незримая молитвенная жизнь святого. В Почаевской Лавре до сих пор сохраняется пещера, где в течение нескольких суток стоял на молитве преподобный Иов. Кроме молитвы и Богомыслия, преподобный занимался физическим трудом.

Вплоть до 1649 года игуменствовал преподобный Иов. 21 октября 1651 года святой получил откровение о своей близкой кончине. 28 октября он, совершив Божественную Литургию, мирно отошел ко Господу. Преподобный Иов был погребен близ пещеры, где подвизался. Над его могилой часто видели чудесное сияние.

Через семь лет после кончины святой Иов трижды явился во сне митрополиту Киевскому Дионисию (Балабану) и известил о том, что пришло время открыть его святые мощи. 28 августа 1659 года нетленные останки преподобного Иова были перенесены в храм Живоначальной Троицы. От них произошло много чудес.

В начале XVIII века Почаевская обитель отошла к униатам. Но чудеса и исцеления от мощей преподобного Иова не прекращались. Униаты уверовали в святость Преподобного, составили ему службу с акафистом и стали просить Папу Римского канонизировать его. Но Папа отказал им по причине ревности святого о Православии.

В 1831 году Почаевская обитель вновь вернулась в ведение Русской Православной Церкви. Чудесные исцеления от мощей преподобного Иова побудили Святейший Синод вторично открыть их, что и было совершено 28 августа 1833 года.
В 1858 году на месте пещерной церкви был устроен новый храм во имя преподобного Иова.